2023.12.20

DNA抽出のための便からのDNA抽出のステップバイステップガイド

marugotoyoten

インペリアル・カレッジ・ロンドンのYoutube動画「DNA抽出のための便からのDNA抽出のステップバイステップガイド」について要点と要約をまとめました

３つの要点

要点１
DNA抽出プロセスでは、潜在的に感染性のある便や有害な化学物質の取り扱いには適切な安全対策と規制が必要です。
要点２
DNA抽出のプロセスには、便サンプルの解凍、均質化、遠心分離、タンパク質沈殿と結合マトリックスのステップのためのチューブの準備が含まれます。
要点３
最終的なステップには、マトリックスの自然乾燥、収集チューブへのDESの添加、最後の遠心分離によるDNAの抽出が含まれます。

要約

準備と安全対策
このビデオでは、qPCRを通じて土壌伝染性寄生虫の検出のために便からDNAを抽出するプロセスを案内します。始める前に、自国および研究所に特定の安全規制があることを認識することが重要です。便中に見つかる土壌伝染性寄生虫は、人間の病原体危険度グループ2に分類されているため、潜在的に感染性のある便や有害な化学物質の適切な取り扱いと廃棄が重要です。

DNA抽出のプロセス
便からDNAを抽出するには、特定の機器と試薬が必要です。便サンプルを氷上で30分間解凍し、抽出用チューブに適切にラベルを付けます。リシンマトリックスチューブにPBSとMT溶解バッファを加えます。便の量は一貫性に基づいて調整し、チューブに加えます。ホモジナイザーを使用してサンプルを均質化し、それから遠心分離します。遠心分離の間に、タンパク質沈殿と結合マトリックスのステップのためのチューブを準備します。

タンパク質沈殿と結合マトリックスのステップ
タンパク質沈殿のステップでは、クリアチューブにPPA溶液を加え、遠心分離されたサンプルの上清液をこれらのチューブに移します。チューブを密閉し、再び遠心分離します。チューブを開けて抽出コントロールを加えます。各サンプルごとに上清液を2つのチューブに分割し、両方のチューブからのマトリックスを1つのスピンフィルターに結合します。フィルターチューブを遠心分離し、キッチンペーパーで乾燥させます。スエゼムバッファでマトリックスを洗浄し、再び遠心分離します。マトリックスを5分間自然乾燥させます。

DNA溶出と最終ステップ
自然乾燥後、最終収集チューブにDESを加え、マトリックスをそっと混ぜます。最終的にチューブを遠心分離し、カラムを廃棄し、蓋を閉めます。おめでとうございます、便から土壌伝染性寄生虫の検出のためにDNAを成功裏に抽出しました！

▼今回の動画